高分辨率熒光顯微鏡

規(guī)格及參數：

1、數據獲取分析：

2、操作參數：

3、硬件參數：

Nanoimager技術特征 

是一種新型的單分子顯微鏡，也是目前單一一款無需校準、無需光學平臺、超小型臺式超分辨顯微鏡。Nanoimager突破了傳統光學的衍射極限，分辨率可達20nm，是*臺大視野單分子FRET顯微鏡。Nanoimager簡單易用、設計緊湊，使用安全無害的一級激光，用戶在普通的實驗室桌面上即可獲得高分辨率的單分子熒光圖像 。適用于單分子示蹤、活細胞成像、蛋白互作、3D成像等研究。

超高分辨率熒光顯微鏡

Nanoimager顯微鏡設計 

♦    Nanoimager具有和傳統顯微鏡不同的特殊設計。傳統顯微鏡需要集成單分子檢測功能的配件，同時也會帶來配件的限制性，而Nanoimager是專門為單分子超分辨成像而設計，為了達到更高的效率而移除了多余的成像元件；
♦    配置更加安全的一級激光,Nanoimager可在任何辦公室、實驗室和教室使用。相對于放置于暗室的大型顯微鏡， Nanoimager更加方便用戶的使用；
♦    Nanoimager的顯微鏡單位面積小于A4紙；配套的激光器通過光纖連接至顯微鏡；

♦    與定制的顯微鏡和傳統的顯微鏡設計不同， Nanoimager始終保持校準狀態(tài)。樣品準備好后可以直接成像，無需花費時間進行調試和校正。
♦    Nanoimager的封閉式系統能夠防止偏移發(fā)生并阻止灰塵和其他污染物進入，可以一直保持在正常工作狀態(tài)。作為一款臺式機， Nanoimager不需要傳統顯微鏡昂貴的配套設施，無需額外配置溫控房間、光學平臺、激光室或暗室。 

超高分辨率熒光顯微鏡

Nanoimager技術原理 

Nanoimager采用PALM/dSTORM技術，利用單分子定位算法并結合光學系統艾里斑的形狀，以超高精度（納米量級）獲得熒光分子的中心位置，然后用CCD將其信號進行采集轉化得到分辨率為20nm的超分辨圖像。

成像模式 

相對于普通的Epifluorescence(EPI)/模式，Nanoimager有total internal reflection fluorescence (TIRF)/ highly inclined and laminated optical sheet (HILO)兩種模式可自由切換。

EPI：激發(fā)較厚的樣品（＞10um），信號噪聲強，即傳統模式。

TRIF：激發(fā)薄層樣品（＜200nm），信號噪聲弱，適用于膜表面成像。

HILO：激發(fā)樣品厚度（＜10um），信號噪聲較弱，適用于大部分成像。

應用領域

單分子示蹤	單分子成像	蛋白質相互作用
蛋白質組裝	表觀遺傳學	DNA納米定位
單分子定位	單分子FRET	外泌體

應用案例

1、單分子FRET 

    Nanoimager是目前*臺用于大視野單分子熒光共振能量轉移(smFRET)的商業(yè)化儀器。 FRET是一種兩個熒光分子間非輻射性的能量轉移方式，反映兩者的分子間距。 FRET一般在2 – 10 nm的間距發(fā)生。 smFRET研究中，作為供體的熒光分子由激光激發(fā)，將能量轉移至臨近的受體熒光分子。被激發(fā)的受體將能量以熒光形式發(fā)散。供體與受體可以連接至同一個或者不同的分子。 

    smFRET可以用于測量核酸或者單個蛋白分子的分子內距離，也可以用于研究蛋白亞基間的相互作用；還可應用于研究藥物對于酶結合位點的構象動力學的作用，或是神經退行性疾病中蛋白的聚集。 smFRET可以用于在單分子層面推到結合常數、反應途徑與停滯時間而不受總體平均值干擾。 

     Nanoimager適用于smFRET的關鍵功能包括：同時雙色成像；單分子散射光強度和總體平均的實時分析；視野中數千個單分子的高通量成像，以及用交替熒光激發(fā) (ALEX) smFRET的功能來定量化學計量與FRET效率。圖4是smFRET用于研究單個DNA霍利迪交叉的動力學。 

用smFRET檢測霍利迪交叉(HJs)的實時構象變化

 2、單分子示蹤

    Nanoimager可以在兩個通道同時示蹤細胞或者純化物樣品中的單分子 (圖5)，并計算擴散系數。細胞中分子的擴散系數可以被示蹤，如酶或蛋白可以通過藥物和抗生素的反應來示蹤。低擴散率可以表示標記分子與另一分子或結構的相互作用或相結合。同時示蹤兩種標記了不同熒光分子的分子可以確定兩者動態(tài)相互作用的水平。 

    Nanoimager可以直接反映純化樣品中熒光粒子的擴散率和預估大小，具有敏感性 (單熒光分子級別) 和特異性 (雙色標記可以顯著降低檢測雜質的可能性)。 

Nanoimager雙色追蹤單分子/粒子

3、使用Nanoimager成像—更大的視野

    Nanoimager的每個成像通道均有50 µm x 80 µm的大視野，而其他大部分單分子顯微設備只有20µm x 20 µm的視野。視野中照明均勻，可以實現單分子或細胞的高通量成像并快速收集數據。
    下圖顯示了以10倍于其他技術的速度對突變的大腸桿菌細胞的不同表型進行成像。為了獲得不同表型的可靠的結果，需要對大量細胞進行比較。使用具有大視野，能夠自動對焦和自動獲取數據的Nanoimager可以顯著加快整個實驗速度和通量。將大視野與超分辨成像結合是Nanoimager的*優(yōu)勢。 

規(guī)格及參數：

1、數據獲取分析：

2、操作參數：

3、硬件參數：